MJさむらいの実験室

Functional analysis of a C.elegans trans-splice acceptor
Richard Conrad, Ruey Fen Liou and Thomas Blumenthal
Nucleic Acids Research, 1993, 21, 913-919

これも、今の実験計画に関連して読んでみた。
ちゃんとよんでないけど。

つまるところ、ＳＬトランススプライシングに必要なＡＧサイトをつぶしたらどうなるのかという事をしらべている。

ＡＧサイトはＳＬトランススプライシングのアクセプターサイト（つまりドナーのＳＬが結合するところ）に絶対必要なサイトである。
このサイトをつぶすと、ＳＬトランススプライシングはどうなるのだろうか。

つぶしてみると、その場所では起こらないが、近いＡＧサイトで起こってしまうようだ。

それを、cryptic acceptor site と呼んでいる。

また、ＡＵリッチな配列が
上流にあるとそこが好まれてアクセプターサイトして使われるらしい。

スプライシングリーダー（ＳＬ）トランススプライシング

ＳＬトランススプライシングが起こる生き物は進化的に不可解。
ＳＬトランススプライシングは一部の生き物で起こる特別なスプライシングである。
ユーグレナ、線虫、脊索動物、ヒラムシ、ヒドラ、ワムシで見つかっている。
英語では、euglenozoans, nematodes, chordates, flatworms, cnidarians, rotifersとなる。
植物、昆虫、脊椎動物では見つかっていない。











ＳＬトランススプライシングの仕組み。
通常のシススプライシングと比べればわかりやすいが、シススプライシングでは５'側のエクソンの３'端がドナーサイトとなる。ＳＬトランススプライシングではスプライシングリーダー配列（ＳＬＲＮＡ）がドナーサイトとなる。ＳＬトランススプライシングはシススプライシングと似たメカニズムで起こっていると考えられている。ＳＬトランススプライングが起こると、それより上流は切り取られてしまうので、ＳＬは常にｍＲＮＡの５'端につく。 ちなみに、ＳＬトランススプライシングで切り取られてなくなってしまう部分をアウトロン（outron)という。ＳＬトランススプライシングが働くためには、ブランチポイント(Branchpoint)Ａとpolypyrimidineサイトが必要だ。

Insertion of Part of an Intron into the 5' Untranslated Region of a Caenorhabditis elegans Gene Converts it into a trans-Spliced gene
Richard conrad, Jefferey thomas, John Spieth, and Thomas Blumenthal
Molecular and Cellular Biology, Apr. 1991, 1921-1926

５’UTRを人工的にトランススプライシング（SL trans-splicing)をおこしてみるという論文。

今から計画を立てようという実験の参考になりそうなので古いけど読んでみた。

vit2/vit-6という普通はトランススプライシングしない遺伝子の５’UTRにvit-5遺伝子のトランススプライシングアクセプターサイトを導入してみる。

その結果、トランススプライシングがおきた。

５’スプライシングサイトを入れればトランススプライシングが起こるだろうと思うので、
それほど衝撃的ではないと思われた。