454のホームページや論文を読んだら書いてあるのですが、
信じられない発想なので理解しがたいと思いますので日本語で説明します。
Margulies et al., 2005, Ｎａｔｕｒｅ, 437, 376-380
http://www.454.com/index.asp
そもそも４５４シークエンサーはゲノムを一度に多量にシークエンスするために開発されました。
一度にというのは、一回のランでという事です。
ぶつぶつに切ったゲノムＤＮＡをサンプルにしてランダムに読むのですが、
一度のランで３００,０００readsも得る事ができます。
しかし、各ＲＥＡＤＳは平均１２０ｂｐと短いです。
上の写真をクリックすると拡大できるので見てください。
ゲノムをブツブツにきります。シアーリングといって、物理的にきります。
この論文では、ＤＮＡを混ぜた液体で霧を作ることで、ＤＮＡを小さな断片にしました。
各ＤＮＡ断片の端にＡとＢのアダプターをつけます。Ｂのアダプターがついたほうがシークエンスが始まる側になります。
一番右側の図はどうやってアダプターをつけるかという説明の図ですが、ややこしいので説明はしませんが、
ビオチンをつかってうまくＡとＢのアダプター対になっているシングルストランドの断片だけを抽出する方法です。詳しくは論文のサプリメンタルデーターで。
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